Uma força do mal, apresentada como um demônio, arranca a vida de Mary Winchester de uma forma macabra: enquanto o pequeno Sammy dorme tranquilo em seu berço, sua mãe é presa no teto e começa a pegar fogo, dando tempo apenas para seu marido, John Winchester, tirar Sammy de seu berço e entregá-lo ao seu irmão, Dean. O caso foi tratado pelos polícias apenas como um incêndio comum, mas o que pai e filhos sabem é que a coisa parece ser mais complicada do que isso.

Após esse acontecimento as vidas de John, Sam e Dean mudam radicalmente. Em busca de vingança, o trio parte em busca do que tenha levado Mary e assim, seu trabalho não oficial passa a ser o extermínio dessas “coisas” que infestam a Terra.

Vários anos se passam até que os membros da família Winchester separam-se. Cansado dessa vida bizarra, Sam, decide ir para a faculdade e levar uma vida “normal”, após uma discussão violenta com o seu pai. Enquanto isso, John e Dean continuam a caçar criaturas do mal.

Três anos mais tarde, a mesma coisa que matou a mãe de Sam e Dean, há 22 anos, retorna e faz com que Jess (namorada de Sam) tenha o mesmo fim trágico de Mary. Somada com o desaparecimento de seu pai, a dor da perda de Jess faz com que Sam se junte a Dean novamente. Desde então, ambos rodam as estradas em um Chevy Impala 1967 por todo os Estados Unidos, caçando tudo que fosse de sobrenatural possivel. Munidos de meios tecnológicos, armas com sal e um velho diário de seu pai, que pode dar muitas pistas de seu paradeiro.

No fim da primeira temporada Sam e Dean finalmente encontram seu pai e descobrem mais sobre o que matou Mary e Jess. Foi o “demônio de olhos amarelos” (como é chamado na série),que tem planos de provocar uma guerra entre os seres do mal e os humanos.

John está obcecado em matar o demônio com o Colt (uma arma, que segundo lendas, consegue matar qualquer coisa) e os três entram em confronto com o vilão nos últimos momentos da primeira temporada.